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crioprotector. Para su empleo, las cepas fueron activadas mediante repiques sucesivos en
TSC e incubadas por 24 h a 37 °C.
Actividad nitrato reductasa
La actividad nitrato reductasa se cuantificó utilizando la técnica descrita por Smibert
y Krieg (1994). Brevemente, se centrifugó una alícuota de un cultivo de 24 h (15 min, 13.000
rpm, 4 °C; Dragon Lab, China), el pellet celular se resuspendió en buffer de inducción
(triptona 10 g/L, KNO3, 1 g/L; cisteína, 1 g/L; pH 7,0) a fin de alcanzar una DO540 = 1.
Una fracción de la suspensión celular fue utilizada para determinar el peso seco,
mientras que otra fracción de 1 mL, cubierta con una capa de aceite mineral estéril para
inducir la actividad nitrato reductasa, fue incubada 2 h a 20 y 30 °C. Como control 1 mL de la
suspensión celular se mantuvo en baño de hielo por 2 h. Luego, estas fracciones se
centrifugaron y las células se permeabilizaron utilizando 500 μL de buffer de reacción (5,05
g/L KNO3, 8,61 g/L K2HPO4, 5,8 g/L NaCl; pH 7,0) y 30 μL de una mezcla de acetona-
tolueno (9:1). Los tubos se agitaron por 3 min y se dejaron reaccionar 30 min a 20 y 30 °C.
Una alícuota de 100 μL de las muestras se transfirió a un nuevo tubo donde se adicionaron 2
mL de agua, 1 mL de solución A (0,8 mg de ácido sulfanílico en 100 mL de ácido acético 5
N) y 1 mL de solución B (0,6 mg de diclorhidrato de 1-naftilendiamina en 100 mL de ácido
acético 5 N). Se midió la absorbancia a 540 nm (Cary UV-Visible 60, Agilent Technologies,
Estados Unidos). La actividad relativa fue calculada como la relación entre la DO540/mg de
peso seco.
Actividad catalasa
Se utilizó el método espectrofotométrico descrito por Gøtterup et al. (2007). Las
cepas activas fueron incubadas en caldo TSC a 37 °C hasta alcanzar una densidad óptica
DO600 = 0,5. Una alícuota de 0,2 mL de suspensión celular se mezcló con 2,8 mL de H2O2 30
mM (0,34 mL de H2O2 con 100 mL de buffer fosfato) en buffer fosfato 50 mM pH 7,0 (6,81
g/L KH2PO4, 8,9 g/L Na2HPO4, 1:1,55). La actividad catalasa fue monitoreada
espectrofotométricamente siguiendo la descomposición del peróxido de hidrógeno a 240 nm
durante 3 min a temperatura ambiente. Como blanco de lectura se utilizaron los mismos
volúmenes de suspensión celular y buffer fosfato sin la adición de H2O2 a fin de eliminar las
posibles interferencias de los componentes celulares y del medio. La actividad fue
cuantificada como la diferencia entre las concentraciones inicial y final de peróxido de